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Phos EasyTip微量磷酸化胜肽純化吸管尖

簡介：

q 在以質譜儀做為分析磷酸化蛋白質的工具時，往往由於磷酸化蛋白質經酵素水解後會出現大量非磷酸化的胜肽，因此容易抑制磷酸化胜肽在質譜上的訊號。為降低非磷酸化胜肽對磷酸化胜肽在質譜訊號上的抑制，純化磷酸化胜肽為必然之途徑。本產品即為一操作方便且可以選擇性地萃取濃縮含有磷酸化胜肽的微量吸管尖。

產品特點：

q 操作簡易，不需如市售之IMAC Tip 須先行以金屬螯合劑做前處理，也不須經過去鹽處理，只需如一般C18微量吸管尖經過潤濕、萃取、洗滌及沖堤程序即可濃縮、純化磷酸化胜肽。(詳見使用方法)

q 不論對單一磷酸化胜肽或多重磷酸化胜肽均有良好之萃取效果。

q 可選擇性地萃取濃縮含有磷酸化胜肽有效降低非磷酸化胜肽影響質譜的分析(如附圖)。在以1:1(500fmol)比例混合之BSA及β-casein樣品中，以本產品萃取其中之磷酸化胜肽，樣品不需甲基化處理即可去除絕大部份之非磷酸化胜肽。

q Phos EasyTip 結構簡單外型為10µL之吸管尖，可適用大多數品牌之微量吸量管(pipetteman)。

Phos-EasyTip 磷酸化胜肽萃取使用方法

溶液配製：

編號	溶液	成分
1	潤溼液	0.1% TFA in DI-H2O
2	洗滌液	pH 8.0 50 mM ammonium bicarbonate (ABC) 50% ACN
3	沖堤液	100mM, pH7.5 ammonium Phosphate
4	樣品配製溶液 (使用於乾燥樣品的配置)	0.1% TFA in DI-H2O

TFA= trifluoroacetic acid (三氟乙酸) ACN=acetonitrile (乙腈)

操作步驟：

1.潤溼及平衡：吸取10 mL潤濕液(編號1) 4~5次，拋棄每次吸取的溶液至

廢液。
2.導入樣品：慢慢地吸取5 mL的樣品，之後將樣品推出至離心管內；

                 重複此步驟10次(以上)。
          註：
          q 萃取前請調整樣品溶液至pH2。如樣品溶液為2mL 25mM ABC，

萃取前須添加0.6mL 1% TFA，以比例調整。

q 若樣品已經冷凍乾燥，請將樣品回溶於5 mL 0.1%TFA中。

以Phos Easy Tip吸取樣品前請將pipette吸取體積定於10 mL。

3.洗滌：取200 mL洗滌液(編號1)的溶液置於微量離心管中。每次吸取

10 mL洗滌液，並推出至廢液的離心管，重複此步驟5次(或以上)。

4.沖堤樣品：將5 mL 編號2之沖堤液置於一微量離心管中，來回吸取10次後

推至離心管。註：沖堤時請將pipette吸取體積定於5 mL，並

避免吸入空氣。
5.質譜分析：
�c q MALDI Tof：沖堤所得樣品以10 mg/mL 溶於1 % phosphoric acid

之DHB 為matrix。
q LC-MS：沖堤所得樣品直接注入LC-MS分析。